慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达效果。Geneup公司推出的最新一代慢病毒包装技术是通过共转染6个质粒载体制备的高效重组慢病毒,与第二、第三代包装技术相比,病毒滴度得到显著提高(25~50倍),且安全更高。包装好的病毒不用浓缩即可直接用于体外细胞试验,也可进一步浓缩后用于体内动物实验。 系统组成 u 表达载体:分组成型和诱导型两类,可表达目的蛋白,miRNA或者shRNA; u 包装质粒:由5个载体按特定比例混合的第四代包装质粒; u 293T 细胞:专门用于慢病毒的包装; u 转染试剂: HFect293属于293细胞特有的转染试剂,具有细胞毒性低、转染效率高切稳定等显著优点,特别适合于包装各类病毒; u Polybrene:有助于提高病毒感染细胞的能力。 系统优势 u 包装容量大:包装容量可以达到6kb; u 宿主范围广:可以广泛感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞; u 病毒滴度高:与第四代包装质粒匹配,病毒原液滴度>107 pfu/ml; u 筛选速度快:一周内即可获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 应用范围 u 感染各种细胞系或原代细胞; u 组成型或者诱导型表达; u 过表达目的蛋白基因、shRNA、miRNA、dTuD或者lncRNA; u 可制备稳转细胞系; u 可用于转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。 制备流程 shRNA 慢病毒干扰载体(mRNA or lncRNA)
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-300 |
|
U6 |
U6-shRNA- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-301 |
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U6/7sk |
U6-shRNA1-shRNA2-7sk- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-302 |
|
CMV |
CMV-EGFP-miR30shR |
PKG-Puro |
pLVc-303 |
|
TRE3G* |
TRE3G-EGFP-miR30shR-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVc-304 |
|
TETO6* |
TETO6-RFP-miR30shR-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系