腺病毒表达系统,可以通过可复制的缺陷腺病毒颗粒,感染分裂或非分裂的哺乳动物细胞,介导外源核酸片段进入并在细胞内瞬时表达。本系统以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架,在克隆、包装、扩增等方面做了改进和优化,达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、产毒迅速、滴度高等效果。所包装的腺病毒已成功应用于信号转导,基因转位,Co-IP,动物实验,干细胞研究等科研实验。
系统组成
u 表达载体:包括pENTR和Ad载体,可表达cDNA,miRNA,shRNA,lncRNA等;
u
u 可以根据需要,选择组成型或诱导型表达载体。
系统优势
u 包装容量大:包装容量可以达到8kb;
u 宿主范围广:可以广泛感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞;
u 病毒滴度高:未浓缩的病毒原液病毒滴度可高达1 X 1010 pfu/ml;
u 病毒可扩增:包装好的病毒可以在293A细胞系中进行扩增。
腺病毒包装流程:
腺病毒载体选择:
一)、目的蛋白基因慢病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
pEA100 |
|
CMV |
CMV-cDNA-polyA, no tag |
pEA101 |
|
CMV |
CMV-FLAG-cDNA-polyA |
pEA102 |
|
CMV |
CMV-HA-cDNA-polyA |
pEA103 |
|
CMV |
CMV-cMyc-cDNA-polyA |
pEA104 |
|
CMV |
CMV-cDNA-P2A-EGFP-polyA |
pEA105 |
|
CMV |
CMV-cDNA-P2A-RFP-polyA |
pEA106 |
|
TETO6* |
TETO6-cDNA-Ubc-rtTA3 |
*DOX诱导型表达体系
二)、pri-miRNA腺病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
pEA200 |
|
CMV |
CMV-EGFP-miRNA |
pEA201 |
|
CMV |
CMV-RFP-miRNA |
pEA202 |
|
TETO6* |
TETO6-RFP-miRNA-Ubc-rtTA3 |
*DOX诱导型表达体系
三)、dTuD (miRNA抑制体) 腺病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
pEA210 |
#3563 |
U6/H1 |
TuD-U6-H1-TuD-EF1a-copGFP-polyA |
pEA211 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk- EF1a-copGFP-polyA |
pEA212 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk- EF1a-RFP-polyA |
pEA213 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk |
四)、shRNA 腺病毒干扰载体(靶向mRNA or lncRNA)
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
pEA300 |
#3563 |
U6 |
U6-shRNA-CMV-EGFP-polyA |
pEA301 |
|
mU6/7sk |
mU6-shRNA1-shRNA2-7sk-CMV-EGFP-polyA |
pEA302 |
|
CMV |
CMV-EGFP-miR30shR-polyA |