miRNA抑制载体 — dTuD
抑制内源miRNA表达是miRNA研究中的重要策略。化学修饰的miRNA抑制剂(Inhibitor)在miRNA的功能丧失(loss-of-function)研究中得到广泛应用,但时常出现某些miRNA抑制效果不佳等问题,尤其是不能达到miRNA的长期稳定抑制。研究证明,Hideo Iba等人开发的miRNA诱饵载体(Tough decoys,简称为TuD),表现出卓越的抑制效果。基于TuD设计原理,本公司研发了抑制效果更佳,性价比更高的miRNA 粘附分子(double TuD,dTuD),并构建到慢病毒表达载体上。
载体特征:
1. 使用人源U6和7sk双启动子驱动miRNA粘附分子的转录,使抑制效果翻倍;
2. 共表达的绿色荧光蛋白(EGFP)可快速便捷地检测转染或感染效率;
3. 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
4. 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
5. 含有嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
miRNA抑制载体文库
本公司已经完成了500多个miRNA dTUD 抑制载体的构建,且数目在逐渐增加。Geneup公司将根据您的需求,提供质粒或包装好的慢病毒颗粒,并承接稳转细胞系构建等技术服务。
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实例1 体外实验比较化学合成的miRNA Inhibitor与本公司构建的dTuD载体对miRNA的抑制效果
CDC25A是miR-322的靶基因,我们用某公司化学合成的miR-322inhibitor转染细胞后,发现内源性miR-322没有得到明显的抑制,靶蛋白CDC25A也没有显著的改变;然而,当用本公司研发的dTuD-miR-322慢病毒载体感染细胞后,~60%的内源性miR-322得到抑制,对应的CDC25A靶蛋白也显著上调(图25)。
图25. 在细胞水平比较化学合成的miR-322 inhibitor和miR-322 dTuD慢病毒载体对内源性miR-322的抑制作用及其下游靶基因CDC25A表达调控的效果分析。
实例2 给小鼠胫部肌肉注射dTuD-miR-1载体后,通过qRT-PCR检测对miRNA的抑制效果(图26)。
图26.体内实验验证dTuD对miR-1的抑制效果
名称 | 产品信息 | 规格 | 单价(元) |
miRNA抑制载体 | 覆盖人类、大鼠、小鼠miRNA | 5 μg | ¥2000 |
miRNA抑制载体慢病毒 | 覆盖人类、大鼠、小鼠miRNA | 106 TU/ml, 10 ml | ¥9000 |