通过人工干预提高细胞内miRNA的表达水平是miRNA研究最常用的技术手段。研究者可以通过转染miRNA类似物(miRNA mimic) 或pre-/pri-miRNA表达质粒以提高细胞内miRNA水平。研究表明,转染含有pre-miRNA及其两端侧翼序列(各100-200 bp)的pri-miRNA表达载体,能在最大程度上模拟miRNA在体内的合成过程,因此被众多研究者青睐。Geneup公司设计的miRNA过表达载体,分为组成型和诱导型两类。
(一)miRNA过表达载体
1. pLVc-200 (pLVc/CMV-EGFP.miRNA):miRNA组成型过表达载体
载体特征:
u 用CMV启动子驱动下游标记蛋白EGFP及miRNA的共表达;
u 共表达的EGFP可快速便捷地检测转染或感染效率;
u 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
u 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
u 含有嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
载体图谱:
2. pLVi-201 (pLVi/TRE3G-RFP.miRNA):miRNA诱导型过表达载体
载体特征:
u 将新一代四环素反应元件(TRE3G)和四环素激活因子(TetON3G)反向克隆到同一慢病毒载体,能显著提高诱导效果,并降低本底;
u 用红色荧光蛋白(RFP)作为报告基因,只有在添加强力霉素(DOX)情况下,RFP及其下游的miRNA才能共表达;
u 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
u 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
u 含有嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
载体图谱:
3. pLVi-202 (pLVi/TETO7-RFP.miRNA):miRNA诱导型过表达载体。
载体特征:
u 将第三代四环素反应元件(TETO7)和四环素激活因子(rtTA3)同向克隆在慢病毒载体;
u 用红色荧光蛋白(RFP)作为报告基因,只有在添加强力霉素(DOX)情况下,RFP及其下游miRNA才能共表达;
u 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
u 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
u 含有嘌呤霉素(Puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
载体图谱:
miRNA表达文库 Geneup公司拥有由700多个最常见人源pri-miRNA过表达载体组成的miRNA表达文库。如果下表中没有您需要的miRNA,可以委托本公司定制。
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应用实例 实例1 miRNA的组成型过表达:
图21.分别将miR-9和miR-210的组成型过表达载体包装成慢病毒后,感染A549细胞,3天后通过S-Poly(T)法检测miRNA过表达水平,对照为不含miRNA序列的pLVc-EGFP。
实例2 miRNA的诱导型过表达:
图22. 将miR-20a的诱导型过表达载体pLVi/TRE3G-RFP.miR20a包装成慢病毒后感染A549细胞,感染3天后用DOX诱导处理,比较诱导不同时间后miR-20a的过表达水平
名称 | 产品信息 | 规格 | 单价(元) |
miRNA组成型过表达载体 | 覆盖人类、大鼠、小鼠miRNA | 5 μg | ¥1800 |
miRNA诱导型过表达载体 | 新产品 | 5 μg | 询价 |
miRNA过表达载体慢病毒 | 覆盖人类、大鼠、小鼠miRNA | 106 TU/ml, 10 ml | ¥8000 |