一步PCR——基因扩增技术的新革命
VitaNavi Technology公司 www.vitanavitech.com
PCR技术已广泛应用于遗传病分子诊断、临床检验、动植物进出口检疫、食品安全监测、土壤微生物检测和亲子鉴定等众多领域。由于血液、食物、土壤等样本中含有大量抑制因子,如血红蛋白、高铁血红素、乳铁蛋白、腐植酸等,对常规Taq DNA聚合酶将产生明显的抑制作用。因此,必须先从这些待测样本分离提取核酸,然后用于PCR扩增。显然,传统方法操作步骤多、成本高、对样品的需要量较大且易于造成交叉污染。美国VitaNavi Technology 公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新,彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。
VitaNaviTechnolog是总部在美国的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的国际高科技生物公司。该公司生产的新一代突变的Taq和Klentaq酶可耐受反应中高浓度的抑制因子,具有内在热启动特性,不需抗体或化学修饰。生产的PCR增强剂可改善PCR的结果, 从GC含量>80% 的样品中成功扩增目的基因。 该公司产品被广泛应用于临床诊断,法医鉴定,动、植物检疫,食品及环境监测,畅销全球40多个国家和地区,是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。
高耐受Taq聚合酶:Omni Taq/ Omni klentaq / Solo Taq/ Alpha Taq
Omni Taq/ Omni klentaq / Solo Taq/ Alpha Taq是基因工程突变的DNA聚合酶,对全血、血清、血浆、土壤、植物、污水、奶酪、牛奶中的PCR抑制因子具较高耐受性,可直接对痕量样本进行PCR,无需DNA分离纯化;本产品在临床诊断,法医鉴定,动植物检疫,食品安全及环境监测等方面得到成功应用;
Omni Taq/ Omni klentaq, Alpha Taq和Solo Taq可以分别耐受高达25%, 30%和40%的全血,耐受较高浓度的血浆或血清、土壤、植物和食品中的抑制物质;当与PCR增强剂(PCR enhancer cocktails, PEC)联合使用时,对PCR抑制因子的耐受性将进一步提高;均可以用染料法进行荧光定量PCR,其中Omni Taq和Alpha Taq还可以用探针法进行荧光定量PCR。
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一、Klentaq1 / Klentaq LA
实例1:用Kelntaq LA扩增大于20kb的大片段基因。
二、高耐受性(Inhibitor-Resistant) 聚合酶:OmniTaq / Omni Klentaq
产品特征:
1. 对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性,可直接对样品进行PCR检测,无需进行DNA分离纯化。
2. 可以耐受高达40% 的全血,20% 的血浆或血清,已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。
3. 可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。
4. 可以从人血液中一步扩增疟疾基因。
5. 与PCR增强剂结合使用时,其耐受性将进一步提高。
6. 使用Omni 酶不仅节省时间、降低成本,而且实现了从微量样品中的扩增,避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。
实例 2:用OmniTaq(OT) 和 Omni Klentaq(OKT)从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。
实例 3:用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。
实例 4:用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。
三、热启动聚合酶(Hot-start) 聚合酶:Cesium Taq / Cesium Klentaq
产品特征:
1. Cesium Taq 和Cesium Klentaq是一种冷敏感的突变体,在室温条件下聚合酶的活性很低,当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来,因而具有内置式热启动功能。
2. 与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比,Cesium Taq 和Cesium Klentaq的聚合酶活性更高,扩增效果更好。
3. Cesium Klentaq具有热启动和高耐受性双重效果。
实例 5:用Cesium Klentaq扩增基因热启动效果比较
四、PCR增强剂(PCR enhancing cocktails, PEC)
产品特征:
1. 联合使用PEC-1 或 PEC-2与高耐受性Taq酶(OmniTaq and Omni Klentaq)可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用,进一步提高PCR扩增效率,简化PCR操作流程提高。
2. PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。
3. PEC也可用于qPCR(SYBR和Taqman probe)。
4. 新研发的PCR增强剂PEC-3 and PEC-4有助于从食品中扩增基因。
实例 6:联合使用Omni Taq or Omni Klentaq及PCR增强剂(PEC)从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌 Inv 基因。
实例 7:联合使用Omni Taq or Omni Klentaq及PCR增强剂(PEC)从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。
VitaNavi Technology产品选购
Taq Enzymes |
Hot Start |
Inhibitor |
TaqMan |
Fast |
Long & |
5X PCR Kit |
Klentaq1 |
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Klentaq1 LA |
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OmniTaq |
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++ |
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OmniTaq LA |
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++ |
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Omni Klentaq |
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++ |
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Omni Klentaq LA |
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Cesium Taq |
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CesiumTaq LA |
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Cesium Klentaq AC |
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Cesium Klentaq AC LA |
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Cesium Klentaq C |
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Cesium Klentaq C LA |
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Solo Taq |
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Solo Taq LA |
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Alpha Taq |
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Alpha Taq LA |
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