S-Poly(T)法检测miRNA原理:
S-Poly(T)®法融合了传统的Stem-loop法和Poly(A)加尾法的优点，使用了与miRNA 3`端特异互补的~6个碱基和11个d(T)组成的S-Poly(T)®特异性逆转录引物，在较高温度下(≥42°C)对加尾后的miRNA进行第一链cDNA的合成，不仅显著提高S-Poly(T)逆转录引物与目的miRNA互补结合的特异性和热稳定性，而且逆转录效率更高，从而大幅提高目的miRNA第一链cDNA的合成及后续qPCR效率。qPCR反应使用特异上游引物、通用下游引物和通用荧光探针对miRNA进行检测。示意图如下：
图1. S-Poly(T)法检测miRNA原理图
为什么要选择S-poly(T) plus技术进行miRNA表达谱分析？
ü 一步到位，检出率高
现有绘制miRNA表达谱的主要策略是miRNA芯片和高通量小RNA测序，其结果必须通过qPCR技术的验证；此外，由于灵敏度所限，芯片和测序技术常常出现漏检和误检等情况。用qPCR技术进行miRNA的表达谱分析将大幅提高差异miRNA的检出率和表达的准确性。
ü 引物分组，特异性高
基于S-poly(T)plus原理开发的miRNA qPCR表达谱分析技术是将S-poly(T)引物进行优化性分组，每组包括7个miRNA及1个内参的特异性反转录引物。优化性分组能最大限度提高cDNA合成的特异性，避免引物之间的相互干扰。数据显示，当同时使用20个以上的S-poly(T)引物进行反转录时，部分miRNA检测的灵敏度和特异性会受到一定影响。因此，我们开发的miRNA表达谱分析技术与现有市面上的同类产品相比，具有更高的灵敏性、特异性及性价比。
ü 高灵敏度，能检测特殊样品
由于灵敏度的显著提高，S-poly(T)plus技术特别适合从血清/血浆、尿液、粪便等材料中检测含量甚微的miRNA表达（图13）。Geneup公司也开发了这些材料的RNA提取试剂盒，建立了完整的体液/排泄物miRNA检测方案及服务平台。
图13. 用S-Poly(T)plus方法检测血清miRNA。（A）比较S-Poly(T)和S-Poly(T)plus检测血清miRNA的灵敏度；（B-F）将血清RNA进行4倍梯度稀释后，用S-Poly(T)plus法检测不同miRNA的表达水平。
应用实例： （1）组织和细胞miRNA检测 案例1 检测IgA肾病病人血清、尿液、肾组织石蜡切片中的二十多个miRNA表达 样品详细信息: 疾病名称 样本类型 IgA肾病 血清 尿液 石蜡组织 健康人对照 血清 尿液 石蜡组织 结果展示： 图15. miRNA在IgA肾病病人治疗前、治疗后及健康人血清中的表达 图16. miRNA在IgA肾病病人治疗前、治疗后及健康人尿液中的表达 图17. miRNA在IgA肾病及健康人石蜡组织中的表达 （2）特定物种miRNA表达谱检测 案例2 小鼠成肌分化相关miRNA表达谱分析 图18. 小鼠成肌细胞C2C12在分化培养基培养4天后检测720个miRNAs的火山图
图19. 表达量变化大于4倍的57个miRNAs的表达变化热图（heat map）
图20. 图19中2个miRNAs在C2C12细胞中的表达水平变化
