直扩RT-PCR试剂盒
VitaNavi Tech公司开发了一系列直扩RT-PCR和qRT-PCR试剂盒。本产品不需繁琐的RNA提取过程,直接从全血、血清/血浆、FTA卡、其它体液或者培养的细胞等样本中直接扩增目的RNA;既可以进行常规RT-PCR,也可以进行real-time qRT-PCR,适用各种RNA病毒及内源RNA的检测。
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实例11:从人的全血、血清或血浆中一步检测丙肝病毒基因
图11. 用Direct One-step Blood RT-PCR Kit或Direct One-step S/P RT-PCR Kit检测244 bp丙肝病毒基因。泳道1: 75℃加热5min释放的病毒RNA;泳道2:完整病毒颗粒;泳道3~9:依次为5 µl含丙肝病毒的EDTA抗凝血浆、枸盐酸纳抗凝血浆、肝素抗凝血浆、血清、EDTA抗凝全血、枸盐酸纳抗凝全血、肝素抗凝全血;泳道10~11:不加RNA或不加逆转录酶的阴性对照;泳道12~18:同泳道3~9,但不含病毒样本。
实例12:从血浆中用Direct S/P qRT-PCR SYBR Green Kit扩增丙肝病毒基因
图12. 用Direct One-step S/P qRT-PCR SYBR Green Kit检测丙肝病毒。将丙肝病毒5倍梯度稀释(从25到0.2个拷贝),与人血浆混合进行直接qRT-PCR检测,分析熔解曲线。箭头标注阴性对照。
实例13:从血浆中用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit定量分析丙肝病毒基因
图13. 用Direct One-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit检测丙肝病毒。选取38血清或血浆样本,用直扩试剂盒直接检测(A),或使用其他品牌的RT-PCR试剂盒检测纯化的丙肝病毒RNA(B);直扩qRT-PCR显示更高的灵敏性(C)。
实例14:用Direct one-step Cell qRT-PCR TaqProbe Kit检测禽流感病毒
图14. 禽流感病毒(H5) 用Direct one-step Cell qRT-PCR TaqProbe Kit进行检测。将禽流感H5抗原分别用PBS稀释100倍、500倍,取5 µl用直接qRT-PCR进行检测;或取等量的病毒RNA用常规qRT-PCR进行检测。结果:直接qRT-PCR的灵敏度高于常规qRT-PCR。
实例15:用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit检测蓝耳病病毒
图15. 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(蓝耳病, HP-PRRSV)用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit进行检测。1 µl HP-PRRSV血清或等量的病毒RNA加入25 µl PCR反应体系,40个循环。结果:直接qRT-PCR的灵敏度高于常规qRT-PCR。
实例16:用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit检测A型流感病毒
图16. 用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit共检测15份甲流阳性样本,反应体系20 μl,上样6 μl。与对照组(Roche病毒核酸纯化试剂盒,某公司A, B型流感检测试剂,理论上样量为10 μl)结果一致,无漏检。
实例17:用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit检测A+B型流感病毒
A+B型流感直扩(不提RNA) 某公司A+B型流感(提RNA)
图17. 用Direct one-step S/P qRT-PCR TaqProbe Kit共检测11份甲型流感和9份乙型流感阳性样本,反应体系25 μl,上样10 μl。与对照组(Roche病毒核酸纯化试剂盒,某公司A, B型流感检测试剂,理论上样量为10 μl)结果一致,无漏检。
VitaNavi Technology www.vitanavitech.com
VitaNavi Technology产品选购
Taq Enzymes |
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Inhibitor |
TaqMan |
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Long & |
5X PCR Kit |
Klentaq1 |
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Klentaq1 LA |
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OmniTaq |
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OmniTaq LA |
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Omni Klentaq |
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Omni Klentaq LA |
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Cesium Taq |
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CesiumTaq LA |
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Cesium Klentaq AC |
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Cesium Klentaq AC LA |
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Cesium Klentaq C |
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Cesium Klentaq C LA |
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Solo Taq |
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Solo Taq LA |
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Alpha Taq |
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Alpha Taq LA |
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