慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，达到持久性表达效果。Geneup公司推出的最新一代慢病毒包装技术是通过共转染6个质粒载体制备的高效重组慢病毒，与第二、第三代包装技术相比，病毒滴度得到显著提高（25~50倍），且安全更高。包装好的病毒不用浓缩即可直接用于体外细胞试验，也可进一步浓缩后用于体内动物实验。
系统组成
u 表达载体：分组成型和诱导型两类，可表达目的蛋白，miRNA或者shRNA；
u 包装质粒：由5个载体按特定比例混合的第四代包装质粒；
u 293T 细胞：专门用于慢病毒的包装；
u 转染试剂: HFect293属于293细胞特有的转染试剂，具有细胞毒性低、转染效率高切稳定等显著优点，特别适合于包装各类病毒；
u Polybrene：有助于提高病毒感染细胞的能力。
系统优势
u 包装容量大：包装容量可以达到6kb；
u 宿主范围广：可以广泛感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞；
u 病毒滴度高：与第四代包装质粒匹配，病毒原液滴度>107 pfu/ml；
u 筛选速度快：一周内即可获得稳定表达特定基因的多种细胞株。
应用范围
u 感染各种细胞系或原代细胞；
u 组成型或者诱导型表达；
u 过表达目的蛋白基因、shRNA、miRNA、dTuD或者lncRNA；
u 可制备稳转细胞系；
u 可用于转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。
制备流程
慢病毒表达载体选择：
一）、目的蛋白基因慢病毒过表达载体
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable Selection |
|
pLVc-100 |
#3563 |
CMV |
cDNA w/o tag |
PKG-Puro |
|
pLVc-101 |
CMV |
FLAG-cDNA |
PKG-Puro | |
|
pLVc-102 |
CMV |
HA-cDNA |
PKG-Puro | |
|
pLVc-103 |
CMV |
cMyc-cDNA |
PKG-Puro | |
|
pLVc-104 |
CMV |
cDNA-P2A-EGFP |
PKG-Puro | |
|
pLVc-105 |
CMV |
cDNA-P2A-RFP |
PKG-Puro | |
|
pLVc-106 |
CMV |
cDNA-EGFP (fusion) |
PKG-Puro | |
|
pLVc-107 |
CMV |
cDNA-RFP (fusion) |
PKG-Puro | |
|
pLVc-108 |
CMV |
cDNA-IRES-copGFP |
PKG-Puro | |
|
pLVi-130 |
TRE3G* |
TRE3G-cDNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro | |
|
pLVi-131 |
TETO6* |
TETO6-cDNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
二）、pri-miRNA慢病毒过表达载体
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
|
pLVc-200 |
|
CMV |
EGFP-miRNA |
PKG-Puro |
|
pLVi-201 |
|
TRE3G* |
TRE3G-EGFP.miRNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
|
pLVi-202 |
|
TETO7* |
TETO7-RFP-miRNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
三）、dTuD (miRNA抑制体) 慢病毒过表达载体
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
|
pLVc-210 |
|
U6/H1 |
TuD-U6-H1-TuD-EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-211 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-212 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk |
PKG-Puro |
四）、shRNA 慢病毒干扰载体（mRNA or lncRNA）
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
|
pLVc-300 |
|
U6 |
U6-shRNA- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-301 |
|
U6/7sk |
U6-shRNA1-shRNA2-7sk- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-302 |
|
CMV |
CMV-EGFP-miR30shR |
PKG-Puro |
|
pLVc-303 |
|
TRE3G* |
TRE3G-EGFP-miR30shR-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
|
pLVc-304 |
|
TETO6* |
TETO6-RFP-miR30shR-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
五）、lncRNA慢病毒过表达载体
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
|
pLVc-400 |
|
CMV |
CMV-lncRNA-EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-401 |
|
CMV |
CMV- lncRNA-EF1a-RFP |
PKG-Puro |
|
pLVc-402 |
|
TRE3G* |
TRE3G-lncRNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
|
pLVc-404 |
|
TETO6* |
TETO6-lncRNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
六）、Ca9-sgRNA慢病毒载体
|
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
|
pLVc-500 |
|
U6/CMV |
U6-sgRNA-EF1a-FLAG-Cas9 |
PKG-Puro |
|
pLVc-501 |
|
U6/CMV |
U6-sgRNA-EF1a-HA-Cas9n |
PKG-Puro |
|
pLVc-502 |
|
U6 |
U6-sgRNA-EF1a-copGFP-PKG-Puro |
PKG-Puro |
|
pLVc-503 |
|
TRE3G* |
TRE3G-Cas9-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
|
pLVc-504 |
|
TRE3G* |
TRE3G-Cas9n-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
|
pLVc-505 |
|
U6 |
U6-sgRNA-EF1a-Bla-P2A-EGFP |
Bla |
*DOX诱导型表达体系
