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产品货号：AB-MLB10004 |
| 产品价格：询价 | |
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规 格：20 rxns
• 载体特征：
– 利用hU6启动子表达shRNA，克隆位点为BamH1-Xho1；
– 含有EGFP标记基因，方便病毒滴度及转导效率的快速测定；
– 利用Puromycin抗性基因筛选稳定表达细胞；
– 与第四代慢病毒包装体系配套，使病毒包装滴度提高25倍以上;
– 包装病毒必须使用无四环素的血清培养液，安全性更高。
构建载体方法：
(1) 设计siRNA序列 （19-21 nt），最好选择以G开头的siRNA序列作为转录的起始位点。
如果siRNA序列以G开头：
设计上游引物（5-3）：
GATC-C-sense of siRNA-loop-antisense of siRNA-TTTTT
设计下游引物（5-3）：
TCGA-AAAAA-sense of siRNA-loop-antisense of siRNA-G
如果siRNA序列不是以G开头：
设计上游引物（5-3）：
GATC-CG-sense of siRNA-loop-antisense of siRNA-TTTTT
设计下游引物（5-3）：
TCGA-AAAAA-sense of siRNA-loop-antisense of siRNA-CG
Loop序列可以选择 TCAAGAG
(2) 酶切载体，用BamHI-XhoI双酶切载体，回收大片段载体，定量（20ng/μl）
(3) 连接及转化，感受态细胞选择stbl3；
(4) 重组克隆酶切鉴定，BamH1能切割，但Xho1不能切割。
(5) 测序鉴定，选用U6测序引物。
