一步PCR——基因扩增技术的新革命
VitaNavi Technology公司 www.vitanavitech.com
PCR技术已广泛应用于遗传病分子诊断、临床检验、动植物进出口检疫、食品安全监测、土壤微生物检测和亲子鉴定等众多领域。由于血液、食物、土壤等样本中含有大量抑制因子，如血红蛋白、高铁血红素、乳铁蛋白、腐植酸等，对常规Taq DNA聚合酶将产生明显的抑制作用。因此，必须先从这些待测样本分离提取核酸，然后用于PCR扩增。显然，传统方法操作步骤多、成本高、对样品的需要量较大且易于造成交叉污染。美国VitaNavi Technology 公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新，彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。
VitaNaviTechnolog是总部在美国的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的国际高科技生物公司。该公司生产的新一代突变的Taq和Klentaq酶可耐受反应中高浓度的抑制因子，具有内在热启动特性，不需抗体或化学修饰。生产的PCR增强剂可改善PCR的结果, 从GC含量>80% 的样品中成功扩增目的基因。 该公司产品被广泛应用于临床诊断，法医鉴定，动、植物检疫，食品及环境监测，畅销全球40多个国家和地区，是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。
2012年12月VitaNavi Tech公司授权“深圳市盎然生物科技有限公司”为其在中国大陆及香港地区的合法代理商，经营所有VitaNavi Tech公司的产品。
核心产品介绍：
VitaNavi Tech公司的核心产品是一类经基因工程改造的Taq DNA聚合酶，主要有Klentaq、Omni Taq、Omni Klentaq、Cesium Taq或Cesium Klentaq等，每一种聚合酶包括常规和LA（long accurate）两种类型。Klentaq是缺失了N端278个氨基酸的Taq酶，与野生型Taq酶相比，截短的Klentaq酶具有更高的保真性和热稳定性；Omni 酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程；Cesium酶是筛选出来的另一种聚合酶突变体，其特征是在常温下活性很低，而当温度达到68℃以上时，Taq酶的活性得到完全恢复，因此，Cesium酶具有天然的热启动（Hot start）特性。
一、Klentaq1 / Klentaq LA
实例1：用Kelntaq LA扩增大于20kb的大片段基因。
二、高耐受性(Inhibitor-Resistant) 聚合酶：OmniTaq / Omni Klentaq
产品特征：
1. 对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需进行DNA分离纯化。
2. 可以耐受高达40% 的全血，20% 的血浆或血清，已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。
3. 可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。
4. 可以从人血液中一步扩增疟疾基因。
5. 与PCR增强剂结合使用时，其耐受性将进一步提高。
6. 使用Omni 酶不仅节省时间、降低成本，而且实现了从微量样品中的扩增，避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。
实例 2：用OmniTaq（OT） 和 Omni Klentaq（OKT）从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。
实例 3：用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。
实例 4：用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。
三、热启动聚合酶(Hot-start) 聚合酶：Cesium Taq / Cesium Klentaq
产品特征：
1. Cesium Taq 和Cesium Klentaq是一种冷敏感的突变体，在室温条件下聚合酶的活性很低，当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来，因而具有内置式热启动功能。
2. 与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比，Cesium Taq 和Cesium Klentaq的聚合酶活性更高，扩增效果更好。
3. Cesium Klentaq具有热启动和高耐受性双重效果。
实例 5：用Cesium Klentaq扩增基因热启动效果比较
四、PCR增强剂（PCR enhancing cocktails, PEC）
产品特征：
1. 联合使用PEC-1 或 PEC-2与高耐受性Taq酶（OmniTaq and Omni Klentaq）可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用，进一步提高PCR扩增效率，简化PCR操作流程提高。
2. PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。
3. PEC也可用于qPCR（SYBR和Taqman probe）。
4. 新研发的PCR增强剂PEC-3 and PEC-4有助于从食品中扩增基因。
实例 6：联合使用Omni Taq or Omni Klentaq及PCR增强剂（PEC）从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌 Inv 基因。
实例 7：联合使用Omni Taq or Omni Klentaq及PCR增强剂（PEC）从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。
五、各种特异性一步PCR试剂盒
VitaNavi Tech公司开发了系列一步法PCR和qPCR试剂盒，可以直接从样品中扩增目的基因。
1. Direct Blood PCR Kit： 从血液中直接扩增目的基因
实例 8：使用Direct Blood PCR Kit从全血中一步扩增CCR5基因
实例 9：使用Direct Blood PCR Kit从不同浓度的全血中一步扩增目的基因
2. Direct S/P PCR Kit： 从血浆中直接扩增目的基因
实例 10：使用Direct S/P PCR Kit从血浆中一步扩增鼠痘病毒基因
3. Direct FTA PCR Kit： 从FTA卡保存的血源中中一步扩增目的基因
实例 11：使用Direct FTA PCR Kit从FTA卡保持的 血浆中一步扩增目的基因
4. Direct cell PCR Kits： 从细胞中一步扩增目的基因
5. Direct tissue PCR Kits： 从动物组织中一步扩增目的基因
实例 12：使用Direct tissue PCR Kit从小鼠尾巴中一步扩增目的基因
6. Direct plant PCR Kits： 从植物中一步扩增目的基因
实例 13：使用Direct plant PCR Kit从混有烟草叶粗提物的人基因组DNA中一步扩增目的基因片段
实例 14：使用Direct plant PCR Kit从1.2mm大小的大豆或西红柿叶子中一步扩增目的基因
六、Direct One-Step RT-PCR Kits：一步法RT-PCR试剂盒
一步法RT-PCR试剂盒是VitaNavi Tech推出的新产品，使用Direct One-Step RT-PCR Kits可以直接从全血、血浆、血清、保存在FTA卡上的血斑、 其它体液或者培养的细胞中进行一步RT-PCR，而不需繁琐的RNA提取过程。该产品极大地简化了RT-PCR反应，特别适合于微量样品中基因表达水平的检测。
1. Direct One-step Blood RT-PCR Kit
实例15：使用Direct One-step Blood RT-PCR Kit从人的全血、血清或血浆中一步检测丙肝病毒基因
2. Direct One-step S/P RT-PCR Kit
3. Direct One-step FTA RT-PCR Kit
实例16：从FTA卡和纸上血斑用Direct One-step FTA RT-PCR Kit直接扩增丙肝病毒基因
4. Direct One-step Cell RT-PCR Kit
实例17：一步法RT-PCR从干扰素诱导的Huh-7细胞中直接扩增ISG56基因。用纯化的RNA为阳性对照
六、荧光定量PCR及RT-PCR试剂盒：
VitaNavi Tech研发了各类相对应的荧光定量试剂盒，包括：
1. Direct Blood, S/P, FTA, or Cell qPCR SYBR Green Kits
2. Direct Blood, S/P, FTA, or Cell qPCR TaqProbe Kits
3. Direct Blood, S/P, FTA, or Cell qRT-PCR SYBR Green Kits
4. Direct Blood, S/P, FTA, or Cell qRT-PCR TaqProbe Kits
试剂盒中预混好各种酶、dNTP和最佳的缓冲体系,操作时只需加入样品及引物即可。
实例18：用Direct Blood qPCR SYBR Green kit从5%的全血中一步扩增疱疹病毒基因
实例19：从血浆中用Direct S/P qPCR SYBR Green Kit一步扩增鼠痘病毒基因
实例20：从血浆中用Direct S/P qPCR TaqProbe Kit定量分析鼠痘病毒基因
实例21：从血浆中用Direct S/P qRT-PCR SYBR Green Kit定量分析丙肝病毒基因的表达
实例22：从血浆中用Direct S/P qRT-PCR TaqProbe Kit定量分析丙肝病毒基因
实例23：从细胞中用Direct cell qRT-PCR TaqProbe Kit定量分析基因表达
详情请查询VitaNavi Tech网站：
http://www.vitanavitech.com/
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